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沈阳模板建站哪家好,郑州网站加工,网站页面制作视频,六安招聘网官网荧光共振能量转移#xff08;Fluorescent Resonance Energy Transfer#xff0c;FRET#xff09;是一种基于非辐射能量转移的荧光技术#xff0c;由德国物理化学家Theodor Frster于1946年首次提出#xff0c;被认为可以测定1.0-6.0 nm距离内分子间的相互作用。20世纪80年代…荧光共振能量转移Fluorescent Resonance Energy TransferFRET是一种基于非辐射能量转移的荧光技术由德国物理化学家Theodor Förster于1946年首次提出被认为可以测定1.0-6.0 nm距离内分子间的相互作用。20世纪80年代初经过科学家的不断探索FRET技术成功应用于蛋白质的结构研究。FRET技术采用物理方法实现在细胞正常的生理条件下从时间连续性和空间动态性对活细胞中的分子间相互作用进行检测并且能同荧光显微镜X射线衍射等多种先进的技术方法相结合推动了分子生物学检测手段的发展。背景说明两个荧光分子供体Donor和受体Acceptor足够靠近时供体分子吸收一定频率的光子后被激发到更高的电子能态该电子在回到基态前通过分子间的电偶极相互作用向邻近的受体分子转移导致供体荧光淬灭受体荧光增强或敏化发射。FRET的产生必须具备3个条件① 供体的发射光谱和受体的吸收光谱部分重叠30。② 供体分子与受体分子的作用距离通常10 nm。③ 供体与受体的偶极矩方向需有一定相关性。图1 FRET的原理机制Choi et al., 2021。服务流程客户在线下单——订单/实验材料确认——载体构建——细胞培养——细胞共转染——FRET检测——数据处理——出具实验报告——结果交付我司可做应用范围为酶活检测采用多肽底物标记与蛋白-蛋白互作验证采用融合蛋白对标记其余应用可接测试单如有个性化要求请致电详联服务内容及说明应用范围1、蛋白酶活性检测设计含蛋白酶切割位点的FRET探针供体-受体通过酶切序列连接酶活性导致探针断裂FRET信号消失。2、蛋白-蛋白互作检测互作蛋白分别标记供/受体荧光蛋白二者结合时FRET信号增强。3、生物传感器开发将FRET探针与感应元件如离子结合域、代谢物结合蛋白融合靶分子结合引发构象变化FRET效率改变。4、药物活性跟踪和检测药物干扰靶蛋白互作或构象时FRET信号变化反映药效。5、蛋白-核酸互作检测蛋白与核酸DNA/RNA结合时标记的FRET对距离变化导致信号改变。6、蛋白构象空间变化检测蛋白构象变化如折叠、变构改变供体-受体距离FRET效率相应变化。技术流程以荧光蛋白CFP供体和YFP受体为例检测蛋白A和B在细胞内的相互作用情况。1、载体构建将待检测的蛋白A和B分别与荧光蛋白CFP和YFP偶联构建融合蛋白表达载体并命名为CFP-A和YFP-B。2、细胞培养与转染根据实验需求培养特定类型细胞。将表达质粒共转染至细胞中进行后续检测。一般分组为A-CFP YFPCFP B-YFPA-CFP B-YFP。3、FRET检测表达质粒转染细胞后分别在10 h、12 h、18 h、24 h、36 h、48 h和72 h进行荧光检测确定最适的荧光图像采集时间。4、FRET图像采集确定FRET配对的激发波长蓝光被调谐分别用于探测最大和最小的供体和受体信号对应的波长用于收集双表达细胞的FRET信号。调整激光变化以便获取最大CFP信号和最小YFP信号的激发光波长采集供体和受体图像并收集FRET信号。为保证结果的准确性每个细胞重复进行3次FRET检测每组样本至少完成6个细胞的FRET检测。5、数据处理去除FRET信号中的光谱串色信号如供体的直接激发DSBT和受体的直接激发ASBT对受体通路的FRET信号进行供体和受体光谱灵敏度、自发荧光和光学噪声的矫正利用矫正系数对双标记细胞进行像素匹配矫正进而分析蛋白A和B在细胞内的互作情况。技术优势1、纳米级空间分辨率精准反映10 nm范围内的分子互作。2、实时动态监测能力活细胞正常生理状态下检测分子间的相互作用和构象变化。3、高灵敏度与特异性可实现单细胞检测单个分子的构象变化光谱矫正显著降低非特异性信号。4、多仪器或技术联用例如显微镜、色谱技术、电泳以及流式细胞技术等提供多样化的研究手段。客户下单及项目信息填写在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录请客户按照页面提示填写细胞名称、培养方式、转染要求、载体信息、抗性筛选等信息细胞及载体可选自行提供或我司提供。实验信息实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户并发送实验报告查看网址。实验结题后实验报告、检测结果可在线查看或打印并永久保留。实验周期致电详询实验交付内容1、生物材料实体重组载体一份质粒和一份大肠杆菌菌液25%甘油菌2、载体信息文件重组载体全序列信息、注释信息、酶切图谱以及测序结果。3、专项分析报告FRET组合图及FRET转移效率统计图完整的实验原始数据及实验报告包括实验过程、实验试剂与设备信息等。我司案例图A显示人源蛋白A和B在BT549细胞中的FRET现象荧光共振能量转移效率均值为11.61%表明A和B在BT549细胞中存在一定的弱互作图B显示A和B在MDA-MB-231细胞中的FRET现象荧光共振能量转移效率均值为13.22%表明A和B在BT549细胞中存在一定的弱互作。图2 A蛋白和B蛋白在BT549细胞A和MDA-MB-231细胞B中的FRET现象Donor Emission with Donor AloneDd指单独供体的发射荧光强度Donor Emission with Acceptor PresentDa指存在受体时供体的发射荧光强度Acceptor Emission with Donor AloneAd指单独供体时受体的发射荧光强度Acceptor Emission with Acceptor PresentAa指存在受体时受体的发射荧光强度corr FRET校正因子FRET eff荧光共振能量转移效率。参考文献[1] Choi JH, Ha T, Shin M, Lee SN, Choi JW. Nanomaterial-Based Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) and Metal-Enhanced Fluorescence (MEF) to Detect Nucleic Acid in Cancer Diagnosis.Biomedicines. 2021;9(8):928.